大肠杆菌Nissle 1917株鞭毛展示6His标签的构建及相关生物学特性分析

为探索大肠杆菌Nissle 1917株(EcN)鞭毛展示的应用,本研究以重组质粒pUC 18-fliC为模板,反向PCR产物经Dpn Ⅰ、ExnaseTMⅡ重组环化,将6His标签基因分别插入无质粒大肠杆菌Nissle 1917 (EcNcured of its two cryptic plasmids pMUT1和pMUT2;EcNc) fliC高变区774 bp～775bp和792 bp～S1t bp之间,构建嵌合鞭毛基因片段fliC01和fliC02.分别将其克隆于自杀性载体pRE112中,构建重组质粒pRE112-fliC01和pRE112-fliC02,并分别转化至EcNc中.通过一次重组和二次重组将嵌合鞭毛基因整合于EcNc基因组中,构建无抗性筛选的重组菌株EcNc fliC01和EcNc fliC02 .对重组菌株进行生长状况、鞭毛形成以及体外细胞黏附试验和小鼠体内定植试验检测,结果表明EcNc fliC01和EcNc fliC02的生长未受影响,表达的嵌合鞭毛能够被H1多抗或His-Tag单克隆抗体识别并组装形成鞭毛丝;重组菌对IPEC-J2细胞的黏附能力及小鼠肠道定植能力与亲本株EcNc相比无显著性差异.本实验结果为进一步研究EcNc鞭毛展示技术应用于活疫苗研制奠定了基础.