高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4传代致弱株HuN4-F30感染性克隆的构建及拯救病毒致病性分析

为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV) HuN4株传代致弱株HuN4-F30感染性克隆,本研究利用高保真DNA聚合酶,分6个片段进行病毒全基因组序列扩增,并通过点突变在其基因组10 808位引入Mlu Ⅰ作为分子标记.通过重叠延伸PCR在5'端上游引入CMV启动子,3'端引入丁型肝炎病毒(HDV)核酶基因和牛生长素多聚腺苷酸化信号(BGH).将各片段依次连接克隆于改造的pBeloBAC 11载体中,构建含有全长HP-PRRSV致弱株cDNA感染性克隆pBeloBAC1 1-HuN4-F30,并将全长质粒直接转染Marc-145细胞拯救出病毒.通过核酸鉴定与测序、分子标记鉴定、间接免疫荧光试验和动物致病性试验等进行鉴定.结果表明,拯救的病毒能够通过Mlu Ⅰ酶切与亲本鉴别,拯救病毒的间接免疫荧光与亲本病毒一致,拯救病毒表现出低致病性.HP-PRRSV HuN4-F30感染性克隆的构建与病毒的拯救,为进一步研究HP-PRRSV传代致弱机制奠定了基础.