miR-145通过靶向吞噬和细胞活力蛋白1抑制乳腺癌细胞侵袭

吞噬和细胞活力蛋白1 (engulfment and cell motility protein 1,ELMO1)可以促进多种癌细胞的侵袭和转移,但ELMO1的表达是否受miRNA的调控鲜有研究.本研究旨在探讨miR-145与ELMO1表达的相关性,以及miR-145通过结合ELMO1的mRNA对乳腺癌侵袭的影响.通过TargetScan(http://www.targetscan.org/)靶基因预测软件预测与ELMO1的3′UTR结合的miR-145.荧光素酶结果证实两者互补结合.Transwell侵袭结果显示,miR-145组和siELMO1 +miR-145组MDA-231乳腺癌细胞穿膜数较对照组分别降低40％ (P＜0.05)和79％ (P＜0.05).siELMO1+miR-145组和siELMO1组细胞穿膜数则无显著差异(P＞0.05).结果 提示,miR-145通过与ELMO1的mRNA结合抑制细胞侵袭.qRT-PCR显示,低侵袭的MCF-7乳腺癌细胞miR-145的表达量较高侵袭的MDA-435细胞高80％(P＜0.05),较MDA-231乳腺癌细胞高75％(P＜0.05),即miR-145与癌细胞侵袭能力呈负相关.Western印迹结果表明,miR-145组ELMO1表达量低于阴性对照组,miR-145抑制组ELMO1表达量高于抑制剂NC组(P＜0.05),证明miR-145抑制ELMO1的表达.qRT-PCR显示,过表达miR-145后ELMO1 mRNA含量与对照组无显著差异(P＞0.05).结果 提示,miR-145对ELMO1的调控作用通过抑制其翻译实现.F-肌动蛋白聚合实验表明,miR-145组和阴性对照组于20 s和60 s时F-肌动蛋白聚合结果存在明显区别(P＜0.05).Western印迹结果表明,miR-145组活化的Rac1表达量较阴性对照组降低60％ (P＜0.05),抑制剂NC组活化的Rac1较miR-145抑制组降低55％(P＜0.05);miR-145组磷酸化的整合素β1较对照组于15 min时降低42％(P＜0.05),于30 min时降低31％ (P＜0.05).由此得出的miR-145过表达显著促进乳腺癌细胞F-肌动蛋白聚合、Rac1活化和整合素β1磷酸化结论.综上所述,miR-145通过靶向ELMO1的mRNA抑制ELMO1翻译,从而抑制乳腺癌的侵袭.