人源CDC50基因的分子克隆及在E.coi中的表达

糖皮质激素受体(GR)为一种特异性配体诱导的转录因子在机体发育、生理及行为等过程中发挥重要作用.这一过程往往受到转录协同调节因子的控制,包括协同抑制因子或协同激活因子的作用.克隆了人源双跨膜受体分子,并命名为hCDC50.该分子编码区有1 056 bp,与鼠源基因mCDC50在核苷酸水平有90%一致性.将hCDC50蛋白的164～317编码序列与GST融合构建原核表达质粒进行重组蛋白的表达与纯化并制备多抗.用二维双向扩散检测抗体为阳性,抗原的滴度为125μg/ml.体外翻译研究显示该基因编码蛋白约为40 kD,与Western检测在动物细胞中的表达一致.用hCDC50真核表达质粒与GR萤光报告系统共转染COS-7细胞显示,hCDC50对GR信号转导有明显的抑制作用,其对GR信号通路的抑制作用达3～4倍以上.hCDC50可能为一个新的协同抑制因子,在抑制GR的转录激活过程中起作用.