Dhori病毒核蛋白基因的重组表达及其抗体制备

[目的]表达和纯化Dhori病毒(DHOV)核蛋白(NP),并制备多克隆抗体.[方法]RT-PCR扩增NP基因,并克隆至原核表达载体pET-28a和真核表达载体pcDNA3.1中.将重组质粒pET-28a-NP转化至大肠杆菌BL21中诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白NP(rNP)的表达并亲和层析纯化rNP,以抗DHOV阳性羊血清检测其抗原性,免疫新西兰兔制备抗血清,以ELISA法检测其效价.将pcDNA3.1-NP转染至Vero细胞,以间接免疫荧光法评估抗体的结合活性,Western Blotting检测抗体与重组蛋白的特异性反应能力.[结果]pET-28a-NP和pcDNA3.1-NP重组质粒构建正确,原核表达的rNP约为55.3 kDa,并能被阳性羊血清识别,制备的抗体效价为1:409600,能特异性识别真核及原核表达产物.[结论]成功表达和纯化rNP,并制备了多克隆抗体,可用于深入研究DHOV核蛋白的生物学特性及其检测试剂.