梨自交不亲和基因cDNA芯片杂交条件优化及应用

[目的]优化梨自交不亲和基因(S-RNase或S基因)cDNA芯片杂交条件,利用芯片检测梨品种S基因型.[方法]提取梨品种雌蕊RNA,Cy3标记引物RT-PCR获得S基因荧光标记特异cDNA序列.设置不同杂交条件,用已知S基因型品种荧光标记的PCR产物在不同条件下分别与芯片杂交,杂交信号分析芯片杂交效果.用芯片优化杂交体系鉴定梨品种未知S基因型,DNA测序验证芯片鉴定结果.[结果]芯片杂交最佳条件:杂交温度42℃,杂交时间8～9h,PCR纯化产物终浓度为200 ng·l-1.优化杂交条件下芯片鉴定晚咸丰、秀水、丽江马占梨1、湘菊、木通梨、甘甜、弥渡小红梨、丽江大中古、金晶和弥渡火把等梨品种S基因型分别为:PpS15 PpS52、PpS4PpS5 PbS5、PpS37、PpS1PpS2 PpS1 PpS3、PpS13 PpS15、PpS12 PbS42、PbS21 PbS22、PpS3 PpS60和PpS5 PpS5.DNA测序验证各品种所含S基因与芯片鉴定结果一致.[结论]梨自交不亲和基因cDNA芯片优化杂交条件后可准确鉴定梨品种所含已鉴定的S基因资源.