骆驼蓬脂转移蛋白基因克隆、表达及体外抗癌活性分析

[目的]构建骆驼蓬脂转移蛋白(PhLTP)原核表达载体,并研究表达产物的体外抗癌活性.[方法]采用RT-PCR法从骆驼蓬(Peganum harmala)叶中扩增PhLTP基因,将其成熟肽片段克隆至pET-30a载体上,构建表达载体pET-30a-PhLTP,将重组质粒转化E.coli BL21进行原核表达,通过镍柱纯化获得重组骆驼蓬脂转移蛋白(rPhLTP),经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,用MTT法检测其体外抗癌活性.[结果]成功构建骆驼蓬脂转移蛋白cDNA表达载体pET-30a-PhLTP,其在E.coli中以可溶性融合蛋白形式表达,分子量约为18 kDa.经镍柱纯化后重组蛋白rPhLTP能够显著抑制宫颈癌HeLa、黑色素瘤B16和食管癌Eca-109细胞的生长,IC50值分别为16.76±1.23、38.92±2.16和9.01±1.01 μg/mL.[结论]克隆了骆驼蓬脂转移蛋白基因并在原核表达系统中成功表达,rPhLTP所显示的显著抗癌活性预示其具有临床应用的潜能.