登革病毒Ⅰ型拷贝数标准质粒和检测体系的建立及其应用

目的 建立登革病毒Ⅰ型(dengue virus-Ⅰ,DENV-Ⅰ)拷贝数标准质粒及其检测体系.方法 将DENV-Ⅰ的前膜蛋白基因克隆至pMD19-T载体,建立DENV-Ⅰ标准质粒,采用实时荧光定量PCR法进行扩增,获得Ct值与病毒拷贝数的关系,绘制标准曲线,得到相应的标准曲线方程.采用建立的标准质粒及检测体系对3份2017年云南西双版纳DENV-Ⅰ患者的血清进行检测.结果 经双酶切及测序鉴定,DENV-Ⅰ拷贝数标准质粒构建正确.实时荧光定量PCR得到的标准曲线方程为y=-0.3005x+ 12.133,R2=0.991 9.3份血清样品原液的病毒拷贝数分别为9 417 703.12、21 949 591.01及19 027 096.91 copies/μL.结论 成功建立了DENV-Ⅰ拷贝数标准质粒及其检测体系,且准确性较好,灵敏度较高,可用于血清样品中DENV-Ⅰ拷贝数的检测.