生物反应器培养Vero细胞和H1N1流感病毒

目的 建立利用生物反应器制备Vero细胞流感H1NI全病毒灭活疫苗的新工艺.方法 利用Vero细胞作为流感病毒增殖的细胞基质,分别以无血清培养液Pro VERO和含血清DMEM培养液,利用5 g/L微载体cytodex-1在3L硅化生物反应器中进行培养,培养温度(37±0.5)℃,溶解氧(50±20)％,pH7.2±0.2,搅拌速度(50±20) r/min,待细胞在微载体上长成单层后,以0.1 MOI接种流感病毒Veto细胞高产适应株H1N1/JD/Va,将收获的病毒液经Sepharose 4FF和Capto Q两级纯化,灭活后制备疫苗原液及成品,按照《中国药典》三部(2015版)方法对其进行检定.结果 使用无血清细胞培养液培养Vero细胞24 h贴壁率约83％,含血清细胞培养液培养24 h贴壁率为112％;灌流培养方式培养至第6天时,细胞均长至单层,无血清细胞培养液最终细胞数达到(133.4±2.0)×104个/mL,含血清细胞培养液最终细胞数达到(353.4±5.9)×104个/mL.无血清病毒维持液培养,第66 h收获病毒液血凝效价为388,单位细胞产毒比例为2.9;含血清病毒维持液培养,第66 h收获病毒液血凝效价为891,单位细胞产毒比例为2.5.用含血清细胞培养液培养Vero细胞接种病毒,收获病毒液制备的疫苗原液及成品经检测,各项指标均符合《中国药典》三部(2015版)相关要求.结论 建立了3L生物反应器含血清细胞培养液培养Vero细胞和H1N1流感病毒的新工艺,为进一步放大生产规模奠定了基础.