猪圆环病毒2型Cap蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

目的 在毕赤酵母中分泌表达猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus 2,PCV2)Cap蛋白.方法 将PCV2-Cap蛋白基因(GenBank登录号:KC620508.1)按毕赤酵母偏好密码子优化后,插入毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA中,重组质粒pPICZαA-Cap经Sac Ⅰ线性化,通过电击转化整合至毕赤酵母GS115菌株的基因组中,构建pPICZαA-Cap-GS115重组酵母菌.经甲醇诱导表达重组Cap蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA法进行鉴定.结果 重组表达质粒pPICZαA-Cap经双酶切和测序证明构建正确;重组酵母菌pPICZαA-Cap-GS1 15经菌落PCR鉴定,可扩增出1 001 bp的目的基因片段;表达的重组Cap蛋白相对分子质量约49 000,可与猪圆环2型阳性血清和小鼠抗His单克隆抗体发生特异性反应.结论 成功利用毕赤酵母表达系统分泌表达了PCV2 Cap蛋白,表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为PCV2亚单位疫苗和ELISA诊断试剂盒的研制奠定了基础.