狂犬病病毒CTN-1株G蛋白的原核表达及基本功能评价

目的 原核表达狂犬病病毒(rabies virus,RV)CTN-1株G蛋白,并评价其基本功能.方法 采用RT-PCR法扩增RV CTN-1株G蛋白基因,插入原核表达载体pGEX-5X-1,构建重组表达质粒pGEX-5X-1-CTN,转化入Rosetta(DE3)pLysS,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经亲和层析纯化后,采用间接ELISA法检测其与阳性血清的结合性能及亲和力.结果 重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;纯化的重组蛋白RV-G相对分子质量约85 000,纯度可达85％,能与阳性血清特异性结合,且具有较好的区分性,与阳性血清的亲和力常数为1.2×1010 M-1.结论 成功原核表达、纯化获得了纯度较高、特异性较好、亲和力较强、灵敏度较高的RV CTN-1株G蛋白,为研究G蛋白的抗原表位、建立针对RV G蛋白的ELISA抗体检测方法及其中和抗体的分选检测奠定了基础.