共表达流感病毒基质蛋白1和基质蛋白2基因的重组杆状病毒的构建

目的 构建共表达流感病毒基质蛋白1 (matrix protein 1,M1)和基质蛋白2(M2)基因的重组杆状病毒.方法 扩增流感病毒A/PR/8/34株的M1和M2全长基因,并将其分别插入到pFastBacdual(pFBD)载体的两个多克隆位点,筛选出阳性重组转座载体pFBD-M1/M2,将其转化含有穿梭载体Bacimd的感受态DH 10Bac细胞,经同源重组获得重组穿梭载体rBacmid-M1/M2,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,包装出重组杆状病毒rBac-M1/M2.采用噬斑形成法检测重组病毒滴度,PCR法检测重组病毒基因组M1和M2基因插入情况,间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot法检测M1和M2基因的表达.结果 经PCR鉴定重组穿梭载体rBacmid-M1/M2构建正确;第3代rBac-M1/M2滴度为1×108 pfu/ml;感染rBac-M1/M2的sf9昆虫细胞经PCR扩增,可见3 600 bp的条带;可在感染细胞的胞内和胞膜上检测到明显的特异性黄绿色荧光;感染rBac-M1/M2的细胞裂解上清与鼠抗流感病毒(PR8株)多克隆抗体发生特异性反应,在相对分子质量约26 000及11000处可见特异性反应条带.结论 成功构建了共表达H1N1亚型流感病毒M1和M2基因的重组杆状病毒,为构建流感病毒样颗粒以及研制新型广谱流感疫苗奠定了基础.