肺炎链球菌神经氨酸酶nanA蛋白的原核表达、纯化及其免疫保护效果

目的 原核表达并纯化肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)神经氨酸酶nanA蛋白,并在小鼠模型中检测其保护效果,评价其作为S.pn疫苗候选蛋白的可行性.方法 构建重组原核表达质粒pET28a(+)-nanA,重组nanA蛋白经IPTG诱导及Ni-NTA亲和层析柱纯化后,采用黏膜(与CT佐剂混合)和腹腔(与Alum佐剂混合)给药途径免疫BALB/c小鼠,建立相应的S.pn感染模型,同时设相应对照组(佐剂+ PBS),ELISA法检测特异性抗体及亚型;小鼠鼻腔滴定试验检测主动免疫保护效果;体内抗定植试验检测nanA蛋白对19F型S.pn在鼻咽部定植的保护作用.结果 重组表达质粒pET28a(+)-nanA经双酶切(Nde Ⅰ/Xho Ⅰ)及测序鉴定证明构建正确;重组蛋白的相对分子质量为55 000,主要以可溶性形式表达,约占菌体总蛋白的55％,纯化后纯度达90％;黏膜免疫组小鼠唾液中IgA及IgG效价分别为1.6× 103和3.2× 102,血清中IgG效价为2.0× 106,亚型主要为IgG2a;腹腔免疫组血清中IgG效价为0.5×106,亚型主要为IgG1;黏膜和腹腔免疫小鼠生存时间较相应对照组显著延长(P＜0.05),黏膜免疫组小鼠生存率较其对照组显著增加;黏膜免疫可显著降低S.pn 19F在宿主鼻咽部和肺部的定植.结论 原核表达并纯化了nanA蛋白,诱导的小鼠免疫反应可有效抵抗S.pn的感染,并可显著降低S.pn在宿主鼻咽部及肺部的定植,表明nanA蛋白是较理想的S.pn疫苗候选蛋白.