呼吸道合胞病毒F1片段膜外区的原核表达及其多克隆抗体制备

目的:利用大肠杆菌表达人呼吸道合胞病毒(RSV)F蛋白的F1片段膜外区,制备其多克隆抗体,为RSV的相关研究提供检测抗体.方法:采用全基因合成方法合成RSV的F1片段膜外区基因,构建带有His-Tag的原核表达载体pET28a-F 1-His,转化大肠杆菌BL21 (DE3)细胞,37℃、IPTG诱导表达,超声波破菌,离心收集包涵体,溶解后经镍离子亲和层析方法进行纯化.纯化的蛋白经SDS-PAGE回收后切胶研磨,免疫大耳白兔,制备RSV的F蛋白多抗血清,采用Western印迹检测血清特异性.结果:构建的pET28a-F 1-His重组质粒在大肠杆菌中表达目的蛋白,其相对分子质量约44x103,与理论值一致,免疫后获得的多克隆抗体可特异性识别RSV F蛋白.结论:制备了RSV F蛋白的兔源多克隆抗体,为进一步研究RSV F蛋白疫苗奠定了基础.