重组脑膜炎球菌P64K蛋白的表达、纯化及载体作用

目的 表达并纯化重组脑膜炎球菌P64K蛋白,观察其载体作用.方法 利用基因工程技术在大肠杆菌中表达P64K蛋白,用硫酸铵盐析沉淀和两步层析纯化P64K蛋白.以重组P64K蛋白为载体蛋白,以已二酰肼为连接剂,在碳化二亚胺的作用下,将P64K蛋白与活化的A群脑膜炎球菌多糖(group A meningococcal polysaccharide,GAMP)结合,制备GAMP-P64K结合物.免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法测定血清特异性抗P64K蛋白和GAMP IsG抗体,分析P64K蛋白的免疫原性.结果 重组P64K蛋白在大肠杆菌中主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的35%.动物实验证明,重组P64K蛋白具有较强的免疫原性,表明P64K蛋白具有载体蛋白作用.结论 在大肠杆菌中成功表达了重组P64K蛋白,以重组P64K蛋白为载体制备的GAMP-P64K结合物具有良好的免疫原性.这为以重组P64K蛋白为蛋白载体制备其他结合疫苗奠定了实验基础.