苏云金芽胞杆菌中荧光分析融合杀虫晶体蛋白的形成

为研究苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白在细胞中的定位及在细胞中的形成,构建了Cry1Ac-GFP融合蛋白,大小约为160kD.将携带crylA.启动子的crylAc融合基因片段克隆到pHT304载体上,获得融合表达载体pHTcry1Ac-gfp.pHTcry1Ac-gfp转化到无晶体突变株HD-73cry-中,获得融合表达菌株HD-73-gfp(pHTcrylAc-gfp).gfp因通过同源重组插入到HD-73内源大质粒pHT73上crylA.基因的3'端,获得原位融合表达菌株HD-73φ(crylAc-gfp)3534.激光共聚焦显微镜和Western杂交分析表明,不对称隔膜形成时,HD-73-(pHTcry1Ac-gfp)和HD-73φ(cry1Ac-gfp)3534细胞中检测到Cry1Ac-GFP融合蛋白的表达.融合蛋白颗粒在细胞中的聚集存在一定的极性,分布于母细胞不对称隔膜附近.Cry1Ac-GFP和CrylAc蛋白对小菜蛾的杀虫活性在95%置信区间内没有明显差异.