5株不同群型霍乱弧菌黏粒文库构建及JS9803株文库应用

目的 研究5株不同群型霍乱弧菌(VC)黏粒文库的构建.方法 染色体DNA提取、酶切,质粒DNA提取、酶切及去磷酸化,连接、包装、转染、铺板,克隆子鉴定和保存、菌落原位杂交,PCR和测序.结果 成功构建吴江-2株(EVC流行株产毒株)、86015株(EVC流行株非产毒株)、JS32株(EVC非流行株非产毒株)、JS9803株(O139群VC产毒株)和GD98200株(O139群VC非产毒株)等5株霍乱弧菌的染色体基因组黏粒文库,文库克隆子中插入35～45kb的染色体DNA片段,库容量分别为3000～5000克隆子.从JS9803株文库中筛选出分别携带CTXψ或nct-CTXψ基因组的克隆子,后一克隆子携带的rstR-ig2基因为新类型.结论 成功构建5株不同群型霍乱弧菌染色体基因组黏粒文库,并对JS9803株文库进行应用.