非洲型寨卡病毒实时荧光定量PCR检测技术的建立

目的 建立非洲型寨卡病毒(ZIKV)实时荧光定量PCR检测技术.方法 人工合成非洲型ZIKV E基因上2 074 ～2 210 bp的保守片段,克隆到pUC57载体作为非洲型ZIKV质粒标准品;以1O8～102 copies/μl共7组质粒标准品制作标准曲线;设计的上游引物为5'-TCAAAGATGATGTTGGAGCT-3'、下游引物5'-CCTCTCACAGTGGCYTCA-3’、探针5'FAM-CCACCATTTGGGGATTCTTACATTGTC-BQ1-3’,采用实时荧光定量PCR检测其特异性、灵敏度及重复性.结果 非洲型ZIKV质粒标准品浓度为76.61 ng/μl;以非洲型ZIKV质粒标准品制作标准曲线,在2.47×(108～102) copies/μl之间有较好线性关系,Rsq为1;能特异检测出非洲型ZIKV质粒标准品,与登革病毒1～4、亚洲型ZIKV质粒标准品、HCV-1b病人血清RNA无交叉反应,检测限为2.47×101copies/tμl.结论 本研究建立了可用于非洲型ZIKV实验室检测的实时荧光定量PCR技术.