灯盏乙素调控RIPK4基因抑制肺癌细胞增殖和迁移的分子机制

目的 探讨灯盏乙素调控受体相互作用蛋白激酶4(RIPK4)表达对肺癌细胞增殖和迁移的影响和机制.方法 正常培养的A549细胞为正常组;用终浓度为25、50、100μmol/L的灯盏乙素处理A549细胞(25、50、100μmol/L灯盏乙素组),MTT法测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞迁移能力,qRT-PCR和Western blot检测RIPK4 mRNA和RIPK4蛋白的表达;建立沉默RIPK4的A549细胞株(转染si-NC组和转染si-RIPK4组),MTT实验检测细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞的迁移能力,Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达水平;建立过表达RIPK4的A549细胞株,给予灯盏乙素处理后(pcDNA+100μmol/L灯盏乙素组和pcDNA-RIPK4+100μmol/L灯盏乙素组),MTT和Transwell实验分别检测细胞增殖和迁移能力.结果 MTT结果显示,随着灯盏乙素浓度的增加,肺癌细胞的增殖活力被显著抑制,并呈浓度依赖性(P<0.05);Western blot结果显示,灯盏乙素呈浓度依赖性地抑制CyclinD1蛋白以及RIPK4 mRNA、蛋白表达,促进p21蛋白表达(P<0.05),选取灯盏乙素100μmol/L进行后续研究.与正常组(0.79±0.15)、(0.80±0.16)、(155.20±14.38)比较,100μmol/L灯盏乙素组肺癌细胞MMP-2(0.42±0.10)和MMP-9(0.46±0.13)蛋白表达以及迁移细胞数目(80.25±10.03)显著减少,差异均有统计学意义(P<0.05).与si-NC组[(7.01±1.08)％、(7.10±2.0)％、(7.16±1.03)％、(147.52±12.17)、(0.81±0.10)、(0.86±0.18)]比较,si-RIPK4组肺癌细胞在24、48、72 h时细胞增殖抑制率(15.03±2.21)％、(33.21±2.10)％、(50.21±5.37)％显著升高,迁移细胞数目(52.68±9.57)显著减少,CyclinD1蛋白(0.28±0.03)和MMP-2蛋白(0.30±0.05)的表达显著减少,差异均有统计学意义(P<0.05).与pcDNA+100μmol/L灯盏乙素组[(15.03±2.21)％、(53.21±5.21)％、(70.21±7.45)％、(57.62±9.28)、(0.25±0.06)、(0.30±0.08)]比较,pcDNA-RIPK4+100μmol/L灯盏乙素组肺癌细胞在24、48、72 h时细胞抑制率(6.10±1.03)％、(7.82±0.59)％、(8.36±1.06)％显著降低,细胞迁移数目(125.71±12.58)显著增多,CyclinD1蛋白(0.52±0.10)和MMP-2蛋白(0.58±0.13)表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 灯盏乙素通过抑制RIPK4表达进而抑制肺癌细胞的增殖和迁移.