艰难梭菌二元毒素B的克隆及其免疫原性分析

目的 将艰难梭菌二元毒素B(cdtB)克隆到pET-28b载体,探索重组His-CdtB蛋白可溶性表达的最佳条件并纯化相应蛋白,分析其免疫原性.方法 为了分析艰难梭菌二元毒素B的免疫原性,先以艰难梭菌标准菌株ATCC BAA-1870为模板,PCR扩增cdtB全长基因序列,克隆到质粒pET-28b,转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞以构建pET-28b-cdtB的原核表达载体,诱导E.coli-pET-28b-cdtB大量表达可溶性重组His-CdtB蛋白并利用镍柱亲和层析法纯化,纯化后的His-CdtB蛋白免疫Balb/c小鼠,分析小鼠血清抗体抗CdtB滴度.结果 成功构建了pET-28b-cdtB原核表达载体,目的蛋白为可溶性表达的最近诱导条件是培养温度为25℃、IPTG浓度为1.5 mmol/L、160 r/min振荡增菌12 h,最佳纯化条件为20 mmol/L的咪唑洗脱杂蛋白后用200 mmol/L的咪唑洗脱目的蛋白,纯化后的His-CdtB蛋白经质谱鉴定成功,该蛋白免疫Balb/c小鼠后产生的抗CdtB抗体滴度达到1:105.结论 纯化后的His-CdtB重组蛋白免疫Balb/c小鼠后产生了高效价抗CdtB抗体,说明其具有免疫原性,为今后进一步进行二元毒素B的诊断及疫苗等研究奠定了实验基础.