水中有毒蓝藻的荧光定量PCR检测法

目的 建立水中有毒蓝藻的荧光定量PCR检测方法.方法 取20 ml纯培养藻液和500 ml采集水样用0.22 μm滤膜进行过滤,收集藻体提取DNA,应用SYBR Green对微囊藻毒素合成酶基因mcyA进行实时荧光定量PCR检测,根据软件获取的以模板标准品与Ct值建立的标准曲线,计算样品中的mcyA基因拷贝数和产微囊藻毒素(MC)的蓝藻的浓度.结果 在13.8～1.38×106拷贝/L的线性范围内,所得回归方程为y=-3.45 lgx+36.2,r=0.989 9.方法检出限为10.7拷贝/L,加标回收率为88.4％～106.0％,RSD为3.6％～4.0％.应用该方法和传统的显微镜检法对实验室纯培养产毒铜绿微囊藻的检测结果呈正相关(r=-0.994 0,P＜0.05).结论 该方法灵敏度高、精确度高、检测范围宽、重复性好,适合用于蓝藻水华暴发的早期预警.