软骨发育不全植入前遗传学诊断的方法学研究

目的：针对软骨发育不全（ACH）高危家系的 FGFR3基因的突变类型（c.1138G > A， p.G380R），建立多种快速特异、行之有效的植入前遗传学诊断（PGD）方法，为实施该 ACH 家系的 PGD创造必要的前提条件。方法在确诊该 ACH 患者特定突变类型的基础上，首先用外周血建立各种PGD方法，包括： A.直接测序法； B. ARMS法； C.酶切鉴定法；D. ARMS／RE法。然后对单个卵裂球的全基因组扩增（WGA）产物进行相应方法学的研究。最后，对各种方法进行优化优选。结果 A.直接测序法：正常对照c.1138为G 纯合子，而患者为G／A 杂合峰； B. ARMS 法：正常对照扩增阴性，而患者有445 bp 的特异扩增条带。 C.酶切鉴定法：正常对照酶切后仍为513 bp，而患者酶切后产生205 bp、308 bp、513 bp三条带； D. ARMS／RE法：正常对照扩增阴性，无法做酶切鉴定。而患者有445 bp扩增产物，经SfcI酶切后可产生27 bp和418 bp两个片段。结论本研究已成功建立针对c.1138 G > A 杂合错义突变的直接测序法、ARMS 法、酶切鉴定法和ARMS／RE 法。所建立的4种方法快速、特异，但各有利弊，同时使用可相互弥补，结合STR 连锁分析可把误诊风险降到最低程度。在正常情况下，可在24 h 内完成对ACH高危胚胎的PGD。