一种黄热病毒反转录恒温热隔绝式PCR检测方法

目的 建立能在野外或现场应用的黄热病毒反转录恒温热隔绝式PCR (reverse transcription-insulated isothermal PCR,RT-iiPCR)快速检测方法.方法 针对黄热病毒基因组5'UTR保守区设计检测引物和TaqMan-MGB探针,优化引物、探针、Taq酶、反转录酶和PCR增强剂等各组分的浓度,利用POCKITTM分析平台,建立黄热病毒RT-iiPCR检测方法,评价方法的稳定性、特异性、灵敏度和检测限等指标.结果 建立了稳定可靠的黄热病毒RT-iiPCR检测方法,在POCKITTM分析平台上只需一键操作即可在58 min内完成检测并自动报告结果.性能评价试验显示该方法稳定性好,特异性和灵敏度分别达到100.00％和92.31％,检测下限≥1 000拷贝.结论 率先建立了黄热病毒RT-iiPCR检测方法,该方法简便实用,适合于现场快速检测.