六神丸和雄黄诱导子宫内膜癌细胞凋亡和DNA损伤的机制

目的:比较经典名药六神丸和雄黄(As4S4)对子宫内膜癌细胞JEC的抗肿瘤作用及其机制.方法:原子吸收法测定六神丸与As4S4中砷(As)的溶解度;噻唑蓝(MTT)比色法比较六神丸与As4S4对细胞增殖的抑制作用,细胞迁移实验比较六神丸与As4S4对细胞迁移的抑制作用;磷脂酰丝氨酸蛋白抗体/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染结合流式细胞术比较六神丸与As4S4对细胞凋亡的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)比较六神丸与As4S4对凋亡和DNA损伤相关蛋白的影响.结果:原子吸收法测定结果显示六神丸的As溶出量为17.4％,As4S4的As溶出量仅为1.6％.但在相同As含量的情况下,与As4S4组比较,六神丸3,10 mg·L-1组的细胞存活率明显降低(P＜0.05),六神丸0.25,0.5,l mg· L-1组早期凋亡率明显增高(P＜0.05),六神丸l mg· L-1组细胞迁移率明显下降(P＜0.05),六神丸1 mg·L-1组剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3),剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-7 (cleaved Caspase-7),剪切的聚ADP核糖聚合酶(cleaved PARP)以及磷酸化的组蛋白(p-H2AX),磷酸化的检测点激酶2(p-CHK2),人共济失调毛细血管扩张症突变激酶(ATM)蛋白表达水平升高(P＜0.05),人共济失调毛细血管扩张症Rad3相关激酶(ATR)蛋白表达水平降低(P＜0.05),而Caspase-3和Caspase-7蛋白表达水平无明显改变.结论:在等As剂量下,六神丸与As4S4均能抑制JEC细胞的增殖和迁移,诱导细胞凋亡和DNA损伤,但六神丸的效果优于As4S4,提示中药复方六神丸中还有其他成分协同As共同参与抗肿瘤作用.