芦丁对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的:研究芦丁对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法:体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤模型,实验分为空白组,MPP+损伤模型组,芦丁干预组.模型组用1 mmol·L-MPP+处理细胞48 h,干预组在MPP+损伤基础上,给予不同质量浓度芦丁(50,100,200,300 mg·L-1).噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Hoechst 33342染色观察细胞核形态变化;2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针标记法观察细胞内活性氧(ROS)的变化;流式细胞仪检测线粒体膜电位;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞色素C(Cyt-C)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组中细胞活性显著降低(P＜0.01),Hoechst 33342染色下可见细胞胞体变小、核皱缩,细胞ROS显著升高(P＜0.01),线粒体膜电位显著降低(P＜0.01).Western blot结果表明,模型组Cyt-C含量升高(P＜0.01),p-ERK1/2水平降低(P＜0.01).与模型组比较,预先4h给予不同浓度的芦丁(100,200,300 mg·L-1)能明显改善SH-SY5Y细胞的活性(P ＜0.05,P＜0.01),抑制ROS升高(P＜0.01),并恢复线粒体膜高能电位(P＜0.05).Western blot结果显示,芦丁能够抑制MPP+引起的Cyt-C蛋白升高(P＜0.01)和p-ERK1/2蛋白降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论:芦丁对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著的保护作用,其机制可能与抗氧化应激有关.