质谱技术鉴定组织型激肽释放酶脑相关蛋白的研究

目的：采用质谱技术鉴定组织型激肽释放酶（ TK）的脑相关蛋白。方法将含全长、无信号肽的 TK基因质粒转染生物素标记 Neuro-2a细胞，细胞裂解液用兔源性抗 GFP抗体进行免疫共沉淀，特异性识别生物素的链亲和素-辣根过氧化物酶进行检测；将纯化的TK蛋白与大鼠脑组织抽提上清液作用后进行免疫共沉淀，裂解蛋白进行 SDS-PAGE电泳银染；将上述电泳所得差异蛋白切胶酶解打质谱后分析数据；RT-PCR检测缺氧再复氧的 Neu-ro-2a细胞内源性差异蛋白在 TK处理后的表达变化。结果 GFP-TK-full转染组较GFP-TK-no和 GFP转染组出现2条差异蛋白条带，分子量为64 kDa 和49 kDa；银染凝胶电泳显示，用抗 TK 抗体免疫共沉淀后有一分子量约为64 kDa 差异蛋白；质谱鉴定出19种差异蛋白；TK浓度依赖性上调 Homer1b/c和 Flotillin-2的 mRNA表达。结论质谱鉴定结果显示与 TK相关的脑蛋白分子量在40~65 kDa。TK的作用机制很可能与 Homer1b/c和 Flotillin-2有关。