赤芝FPS基因酵母单杂交文库构建及其上游转录因子的筛选

目的 筛选赤芝三萜合成途径中法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的上游调控转录因子.方法 首先克隆了FPS基因启动子,并连接至pAbAi质粒构建诱饵载体pAbAi-FPS.将pAbAi-FPS转化Y1H酵母感受态细胞构建诱饵菌.采用SMART技术构建赤芝酵母单杂交cDNA文库,再将纯化的双链cDNA、pGADT7-Rec共转化诱饵菌株,筛选FPS上游的转录调控因子.结果 构建了含pAbAi-FPS的诱饵载体并筛选出诱饵菌株,构建了cDNA文库并转化诱饵菌株,筛选出阳性克隆37个,得到作用FPS基因上游的转录调控因子18个,包括转录因子3个、核糖体蛋白5个及其他家族蛋白10个.结论 筛选出转录因子G1SNF2、G1MHR和GIZn2Cys6为调控FPS表达的候选基因,为深入研究FPS基因的表达调控机制奠定了研究基础.