成年SD大鼠胃窦Cajal间质细胞分离、培养及鉴定

目的 探讨成年SD大鼠胃窦起搏细胞Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal,ICC)的原代分离、培养及鉴定方法,为深入研究其生理功能提供条件.方法 8~9周龄SD成年大鼠,禁食24 h,乙醚吸入麻醉,颈椎脱臼处死.无菌条件下采用精细解剖方法快速取出胃窦平滑肌组织,将其剪成1~2 mm3小块后,使用II型胶原酶消化法于37℃培养箱内消化60 min,离心后过200目筛,接种于DMEM/F12完全培养基(含5 ng/mL干细胞因子)中进行培养.用酪氨酸蛋白激酶受体c-kit特异性抗体免疫荧光染色鉴定细胞类型.结果 培养72 h后,于倒置显微镜下观察,可见细胞贴壁,呈不规则三角形、星形或梭形,有多个突起;随着培养时间的延长,各突起彼此相互连接形成网络;此原代培养细胞c-kit抗体免疫荧光染色呈阳性.结论 成功建立了一套由成年SD大鼠胃窦组织采用II型胶原酶消化法原代培养ICC的方法,为ICC的生理功能、病理改变以及胃肠道生理与病理关系的研究奠定了基础.