基于活性氧簇-自噬通路调控的加味黄芪赤风汤对肾小球足细胞的保护机制研究

目的 观察加味黄芪赤风汤基于活性氧簇(ROS)-自噬通路对AngⅡ诱导肾小球足细胞损伤的保护机制.方法 制备低、中、高剂量加味黄芪赤风汤(分别应用生药浓度为0.57、1.15、2.29 g/mL的加味黄芪赤风汤灌胃小鼠)含药血清及替米沙坦(0.83 mg/mL灌胃小鼠)含药血清,采用AngⅡ(1×10-7mol/L)诱导足细胞损伤模型,分为空白组,模型组,加味黄芪赤风汤低、中、高剂量组以及替米沙坦组;为验证自噬与模型的关系,设置3MA与氯喹组.采用Western Blot检测足细胞损伤相关蛋白nephrin、podocin及自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、P62表达,溶酶体荧光探针检测自噬流活性,透射电镜观察足细胞内自噬体的形成,流式细胞仪检测细胞内ROS平均荧光强度(MFI).结果 与空白组比较,模型组足细胞nephrin、podocin、P62表达下调(P＜0.01),LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ、Beclin-1表达上调(P＜0.01),ROS的MFI增强(P＜0.01).透射电镜及溶酶体荧光探针结果显示模型组自噬体数量增多,溶酶体表达增强.与模型组比较,加味黄芪赤风汤中、高剂量组及替米沙坦组nephrin、podocin、P62表达上调(P＜0.01,P＜0.05),LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ、Beclin-1表达下调(P＜0.01,P＜0.05);3MA及氯喹组足细胞nephrin、podocin表达下调(P＜0.01,P＜0.05);加味黄芪赤风汤低剂量组Beclin-1表达下调(P＜0.05);各给药组ROS MFI减弱(P＜0.01,P＜0.05).透射电镜及溶酶体荧光探针结果显示加味黄芪赤风汤组及替米沙坦组自噬体数量减少,溶酶体表达减弱.结论 AngⅡ通过下调nephrin、podocin表达损伤足细胞;加味黄芪赤风汤可上调AngⅡ诱导的nephrin、podocin表达,缓解足细胞损伤;加味黄芪赤风汤可能基于ROS-自噬通路,下调AngⅡ诱导的自噬流,拮抗肾小球足细胞损伤.