基于Notch通路研究化痰降气胶囊含药血清对人支气管上皮细胞MRP1的影响

目的 基于Notch通路探讨化痰降气胶囊含药血清对人支气管上皮细胞(16HBE)中多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达和外排功能的影响.方法 根据血清药理学的方法制备化痰降气胶囊含药血清和空白血清,然后将含药血清分为5％、10％、15％、20％4个浓度对16HBE细胞进行干预,CCK-8法检测细胞增殖率筛选出最佳作用浓度;细胞分为空白血清组、香烟烟雾提取物(CSE)+空白血清组、CSE+含药血清组、化痰降气胶囊含药血清组、Notch通路抑制剂DAPT+空白血清组、DAPT+含药血清组,用Western Blot法检测各组Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达;以5-羧基二乙酸荧光素(5-CFDA)为底物,采用流式细胞术检测细胞内荧光强度的变化评价MRP1的外排功能;免疫荧光法检测Notch1的胞内段(NICD)核移位活性.结果 化痰降气胶囊含药血清的最佳作用浓度为15％.与空白血清组比较,含药血清组Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达呈浓度依赖性升高(P<0.05,P<0.01),MRP1转运体的外排能力明显提高(P<0.01),细胞核内NICD的荧光强度有所增强;而CSE+空白血清组蛋白表达水平明显降低(P<0.01).与CSE+空白血清组比较,CSE+化痰降气胶囊含药血清组的Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01);与化痰降气胶囊含药血清组比较,DAPT+化痰降气胶囊含药血清组的Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达水平均降低(P<0.05,P<0.01),MRP1的外排能力也降低(P<0.01),胞质胞核荧光强度均减弱.结论 化痰降气胶囊含药血清可能通过Notch通路上调16HBE细胞中MRP1的表达和外排功能,这可能是其治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的作用机制之一.