大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定

目的:原核表达和分离纯化人β-catenin(138-781 aa)蛋白并制备特异性大鼠抗人β-catenin多克隆抗体.方法:利用PCR扩增β-catenin基因片段并克隆至pET-30a(+)表达载体构建重组质粒.将重组质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中,经原核表达优化后,诱导β-catenin蛋白表达,以SDS-PAGE和Western blot实验进行鉴定.采用亲和层析方法分离纯化β-catenin蛋白,以荧光偏振实验进行生物学活性鉴定.用β-catenin蛋白为抗原免疫大鼠制备多克隆抗体,随后采用ELISA和Western blot实验检测多克隆抗体的效价和抗原特异性.结果:成功进行了β-catenin蛋白的原核表达与分离纯化.荧光偏振实验表明纯化的β-catenin蛋白具有良好的生物学活性.ELISA实验表明抗人β-catenin多克隆抗体效价可达1:128000.Western blot实验证实抗人β-catenin多克隆抗体具有良好的抗原特异性.结论:成功进行了大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定,为深入研究β-catenin的生物学功能奠定了实验基础.