检测侵染生姜的烟草花叶病毒ELISA的建立

目的:建立检测侵染生姜的烟草花叶病毒的ELISA方法.方法:用RT-PCR方法检测侵染生姜的烟草花叶病毒,挑选仅含烟草花叶病毒的生姜叶片,采用离心方法提取叶片中的烟草花叶病毒,通过12％ SDS-PAGE 和5％～20％梯度SDS-PAGE二次制备电泳分离出烟草花叶病毒的外壳蛋白CP,将含CP的聚丙烯酰胺凝胶磨细后免疫小鼠,获得抗血清.用Western blot检测抗血清特异性,ELISA检测抗血清的结合性,通过亲和层析纯化抗血清中的IgG.以待测生姜叶片液为抗原包被,纯化的抗血清IgG为一抗,羊抗小鼠 IgG为二抗,建立检测侵染生姜的烟草花叶病毒的间接ELISA.结果:抗血清中的IgG仅仅与烟草花叶病毒的CP结合,并能够结合天然烟草花叶病毒颗粒.建立的ELISA对花叶病生姜叶片的检测结果与RT-PCR检测结果一致.结论:成功地建立了检测侵染生姜的烟草花叶病毒的ELISA方法.