弓形虫免疫作图蛋白1互作因子的筛选与鉴定

目的 采用酵母双杂交技术筛选弓形虫免疫作图蛋白1 (TgIMP1)在人类宿主胞内的相互作用因子并鉴定其相互作用. 方法 以刚地弓形虫RH株基因组为模板,PCR扩增TgIMP1全长编码序列,扩增产物经双酶切后插入诱饵表达质粒pGBKT7中.重组质粒转化入酵母Y2H Gold细胞中,采用酵母细胞融合方法与人胎脑cDNA酵母文库菌双杂交筛选互作因子.筛选的阳性质粒经测序和共转化验证TgIMP1体内相互作用. 结果 成功构建了不具备细胞毒性和自激活活性的pGBKT7-IMP1重组诱饵表达质粒,该诱饵在人胎脑cDNA文库中共计筛选得到Ring finger protein 2 (RNF2)、Murine retrovirus integration site 1 homolog(MRVI1)、Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A3(HNRNPA3)等6种相互作用因子. 结论 筛选得到6种人类宿主能够与弓形虫TgIMP1发生相互作用的蛋白因子,其中RNF2体内可与TgIMP1直接互作.