刚地弓形虫RACK1蛋白与PKC蛋白结合作用的研究

目的 研究刚地弓形虫RACK1蛋白与PKC蛋白之间的结合特性. 方法 采用PCR方法扩增弓形虫RACK1基因,双酶切后与pGEX 4T-1连接,构建原核表达载体pGEX-4T-1-RACK1,转化入BL21大肠埃希菌中,用0.8mmol/L IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE检测并进行Ni-IDA亲和层析纯化,采用Western blot分析RACK1蛋白与PKC蛋白的结合作用. 结果 PCR扩增出966 bp的RACK1基因开放读码框,成功构建pGEX4T-1-RACK1原核表达载体,转化BL21后用IPTG诱导4h～6h,SDS-PAGE检测到约36 ku的表达产物,Western blot检测RACK1蛋白能与PKC蛋白结合. 结论 成功构建了pGEX-4T-1原核表达载体,表达产物RACK1蛋白能与PKC蛋白结合.