布鲁氏菌omp25重组BCG的构建及其疫苗作用检测

目的 构建分泌性表达布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因重组卡介菌(rBCG-omp25),并免疫BALB/c小鼠,观察其免疫作用.方法 利用分子生物学技术构建重组穿梭分泌载体pMV261-Ag85B-omp25,电穿孔技术导入卡介苗(BCG).通过抗生素筛选、重组卡介苗基因组PCR扩增、测序,以及Western blot对重组卡介苗进行鉴定.分别用rB-CG-omp25、BCG腹腔接种BALB/c小鼠,于免疫后第10、20、30、40和50 d称重,尾部采血,用表达纯化的融合蛋白OMP25-32a检测免疫小鼠抗体的生成情况,用流式细胞仪(FCM)检测CD4+、CD8+T淋巴细胞百分率,并计算CD4+/CD8+T细胞比值.制作小鼠肝组织切片,HE染色观察病理学变化.结果 重组卡介苗rBCG-omp25含有Ag85B-omp25序列,大小为745 bp;Western blot表明rBCG-omp25可分泌表达布鲁氏菌OMP25.rBCG-omp25免疫小鼠后第20 d,用Western blot检测到布鲁氏菌OMP25特异性抗体;rBCG-omp25免疫组和BCG免疫组的CD4+、CD8+T细胞百分率分别为38.68％、11.32％和、48.44％、14.01％,PBS组为33.24％、9.81％,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫后50 d内rBCG-omp25组、BCG组与PBS组小鼠体重差异无统计学意义(P＞0.05);各实验组小鼠肝组织均未见明显病理改变.结论 构建的rBCG-omp25能够表达特异性蛋白OMP25.该蛋白能刺激小鼠产生特异性抗体,能刺激小鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞增殖.rBCG-omp25毒力弱,可作为预防布鲁氏菌病的疫苗候选株之一.