CV-A16疫苗候选株 K168-8Ac 低温连续传代效果的评价

目的 通过对柯萨奇A组16型 (coxsackievirus A16, CV-A16) K168-8Ac毒株低温连续传代后的生长稳定性和免疫原性进行评价, 为柯萨奇A组16型减毒疫苗的研究提供指导.方法 用本科室筛选的CV-A16疫苗候选株K168-8Ac在KMB17细胞上32℃连续传代到第80代 (P80), 从中选取8个代次的病毒P35、P40、P50、P60、P64、P66、P69、P80, 分别进行感染性滴度检测, 然后用这8个代次的病毒原液分别免疫BALB/c小鼠, 初次免疫后60 d进行加强免疫, 于初次免疫后28 d、60 d及加强免疫后7 d、21 d进行采血;同时选取第80代的病毒进行10倍系列稀释至10-7, 分别用原液和10倍系列稀释的8个稀释度的病毒 (即7.75 lgCCID50/ml～1.75 lgCCID50/ml) 免疫BALB/c小鼠, 初次免疫后第28天进行加强免疫, 于初次免疫后28 d、加强免疫后7 d、加强免疫后21 d采血, 用体外微量细胞病变法进行中和抗体效价检测.结果K168-8Ac毒株在32℃条件下在KMB17细胞上连续传代后, 8个代次的病毒均有较高的感染性滴度, 感染性滴度在7.37 lgCCID50/ml～7.75 lgCCID50/ml间波动 (平均为7.56 lgCCID50/ml), 表明其增殖特性较稳定.8个代次的病毒免疫小鼠后抗体效价及抗体阳转率之间差异均无统计学意义, 初次免疫28 d (一次免疫) 中和抗体效价GMT仅为1:27.1 (1:11～1:64), 但初次免疫60 d时GMT比初次免疫28 d增长了2.0倍, 达到1:54.3;加强免疫后7 d、21 d GMT为1:422.0和1:1 140.0, 分别比初次免疫28 d增长了15.6倍及42.1倍.用P80的病毒以7.75 lgCCID50～1.75 lgCCID50的剂量免疫小鼠, 其中和抗体效价随感染剂量的降低而降低;初次免疫后第28天, 7.75 lgCCID50及6.75 lgCCID50两个病毒剂量的中和抗体效价GMT分别为1:32及1:14, 而5.75 lgCCID50以下的剂量全部阴性;加强免疫后7 d及21 d, 病毒含量低至4.75 lgCCID50的GMT仍能达到1:11, 但低于3.75 lgCCID50则为阴性, 加强免疫后7 d及21 d, 平均中和效价均小于1:4;P80的病毒初次免疫后第28天加强免疫, 加强免疫后7 d及21 d中和抗体GMT为1:1 552、 1:2 048;初次免疫后60 d加强免疫组, 加强免疫后7 d及21 d GMT为1:294.1、 1:1 176.3.结论 柯萨奇病毒A组16型K168-8Ac 32℃低温连续传代后具有良好的生长稳定性和免疫原性.