HIV-1特异性单抗2G12单价抗体的构建及活性分析

目的 构建单价抗体并与IgG比较结合活性及中和活性的差异.方法 对IgG1抗体重链恒定区基因进行改造,分别构建N端截短型的IgG1重链恒定区基因IgG1-tH和去除绞链区二硫键及CH2、CH3区的稳定非共价键的2G12重链基因2G12-HM.将IgG1-tH与2G12抗体重链和轻链基因表达质粒共转染293T细胞,表达含有完整Fc的单价抗体;将2G12-HM和轻链基因表达质粒共转染293T细胞,表达半分子型的单价抗体.通过非还原SDS-PAGE对表达抗体的大小进行鉴定,并用ELISA和微量中和实验比较原型2G12抗体和单价抗体的结合活性及中和活性.结果 以HIV-1中和抗体2G12为模型通过基因改造成功表达了两种单价抗体,一种为完整的重链、轻链以及N端截短型的重链分子组成的包含1个Fab和1个Fc的单价抗体2G12-tH;另一种为1条重链和1条轻链组成的半分子型单价抗体2G12-HM.两种抗体均可与抗原有效结合,且与IgG分子相比差异无统计学意义.中和实验结果发现IgG抗体能中和的,病毒两种单价抗体也均能中和.结论 成功构建了两种单价抗体,与IgG相比其结合活性和中和活性无明显变化.