舒洛地特通过抑制NOX4/NLRP3通路减轻高糖诱导的视网膜血管损伤

目的:观察舒洛地特(SDX)在糖尿病状态下对视网膜微血管内皮细胞的保护作用.方法:(1)采用高脂喂养及腹腔注射链脲佐菌素的方法构建C57BL/6小鼠的2型糖尿病模型,对小鼠腹腔注射SDX或等体积生理盐水治疗12周.用伊文思蓝法检测视网膜微血管渗漏及微血管密度改变;用Western blot、免疫荧光等方法检测各组小鼠视网膜中NLRP3炎症小体成分、紧密连接蛋白1(ZO-1)及NADPH氧化酶4(NOX4)的表达情况.(2)用高糖处理人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs),并与梯度浓度的SDX共处理;用腺病毒感染HRMECs以过表达NOX4或者用siRNA转染HRMECs以敲减NOX4,观察NLRP3炎症小体成分、NOX4、ZO-1和VE-钙黏着蛋白(VE-Cad)的表达情况,以及活性氧簇(ROS)的生成情况.结果:(1)SDX处理增加糖尿病小鼠视网膜中ZO-1蛋白的表达,抑制糖尿病小鼠视网膜微血管渗漏,增加糖尿病小鼠视网膜微血管密度和节细胞数量,并抑制NLRP3炎症小体的活化(P<0.05).(2)在高糖刺激的HRMECs中,SDX处理增加ZO-1和VE-Cad蛋白的表达,显著抑制NLRP3炎症小体活化及NOX4介导的ROS生成(P<0.05).(3)沉默NOX4可降低高糖刺激下HRMECs的NLRP3炎症小体活化和ROS生成,并抑制高糖刺激诱导的ZO-1和VE-Cad表达下降(P<0.05).(4)过表达NOX4可明显增加HRMECs中NLRP3炎症小体活化和ROS生成,降低ZO-1和VE-Cad蛋白的表达(P<0.05);过表达NOX4后再予以SDX处理能部分逆转SDX引起的以上改变(P<0.05).结论:SDX通过抑制NOX4/ROS/NLRP3通路减轻高糖诱导的视网膜血管内皮损伤.