MicroRNA-21靶调控NCM460细胞ROCK1基因上调occludin表达

目的:探讨微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对人正常结肠上皮细胞系NCM460中紧密连接相关蛋白——闭合蛋白(occludin)表达的影响,并分析其可能的靶基因.方法:利用miR-21过表达慢病毒建立miR-21过表达NCM460细胞系,qPCR检测miR-21表达水平,Western blot检测occludin 表达情况.生物信息学方法预测miR-21的靶基因,根据评分和文献检索选择相应靶基因ROCK1进行进一步研究,利用miR-21 mimic和inhibitor转染NCM460细胞,同时检测miR-21以及ROCK1的表达水平;采用双萤光素酶报告基因实验验证ROCK1是miR-21的靶基因.结果:在NCM460细胞中过表达miR-21后可上调紧密连接相关蛋白occludin的表达.生物信息学分析预测ROCK1可能为miR-21的靶基因.在NCM460细胞中过表达miR-21可下调ROCK1的mRNA和蛋白水平,抑制miR-21可上调ROCK1的mRNA和蛋白水平.萤光素酶报告基因验证ROCK1为miR-21的靶基因.结论:在NCM460细胞中,miR-21能上调肠屏障功能相关蛋白occludin的表达.ROCK1是miR-21的靶基因,miR-21可能通过靶调控ROCK1促进occludin的表达.