MUC1 mRNA 体外负载树突状细胞诱导细胞毒性T 细胞对非小细胞肺癌的杀伤作用

目的：将体外扩增的黏蛋白1（ MUC1） mRNA转染入成熟的树突状细胞（ DCs ），观察其体外诱导的特异性抗肿瘤效应。方法：将分离提纯的单核细胞培养诱导为DC并用流式细胞术鉴定。构建pcDNA3．1（＋）-MUC1质粒，体外转录为mRNA，电穿孔法转染DCs。定量PCR检测转染的DCs中MUC1的表达；MTT法检测T细胞增殖情况；流式细胞术检测CD8＋在T细胞的表达；LDH释放法测定细胞毒性，ELISA检测IFN-γ分泌水平。结果：流式细胞术结果表明成熟DCs标志表型的表达明显高于对照组。定量PCR结果说明转染后的DCs MUC1 mR-NA相对表达量增高。转染组DCs与T细胞按1∶10共培养时，刺激增殖能力明显高于未转染组，且CD8＋T细胞表达率高于未转染组，诱导产生特异性的细胞毒性T细胞杀伤表达MUC1蛋白的靶细胞，而未转染组的杀伤作用较弱。转染组DCs与T细胞共培养的上清中IFN-γ的分泌水平高于未转染组。结论：电穿孔法可以将MUC1 mRNA成功转染至DCs，产生特异性杀伤效应，为以MUC1为靶点的非小细胞肺癌的免疫治疗提供实验和理论依据。