GII.6型诺如病毒P蛋白原核表达及多克隆抗体制备

目的:原核表达GII.6型诺如病毒(norovirus, NoV)P蛋白和制备多克隆抗体。方法:扩增NoV GII.6型P区基因并克隆至pET28a载体，转化感受态 E. coli BL21(DE3)，IPTG诱导进行原核表达。使用Ni－NTA亲和柱层析进行纯化，重组蛋白进行寡糖结合分析，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体血清，ELISA测定该抗体的效价，western blot (WB)检测抗体的特异性，并进行有效性评估。 结果:成功构建了原核表达载体GII.6P-pET28a并表达相对分子质量约40×10 3的GII.6型P蛋白；Ni柱亲和层析纯化后纯度达90%以上；寡糖结合显示GII.6型P蛋白与B、le b、H2型结合，与A、H1、le a型不结合；ELISA测得抗体的效价为1∶160 000；WB显示抗体具有较高特异性；交叉实验未显示出对GII.4的亲和力。 结论:成功表达了GII.6型P蛋白并获得高效价的抗体，为GII.6的检测和疫苗研发提供有效工具。