致病菌金黄色葡萄球菌及肺炎链球菌代谢产物及菌体成分对人呼吸道上皮细胞结构与功能的影响

目的 探究呼吸系统常见致病菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pneumonia)不同成分对人呼吸道肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)结构与功能的影响.方法 A549细胞分别与S.aureus、S.pneumonia细菌培养上清、 细菌裂解物及灭活菌体共培养,采用CCK8方法检测上述不同细菌成分对A549细胞增殖功能的影响,采用流式细胞术(flow cytometry)检测不同刺激物诱导细胞发生凋亡与坏死的作用,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其对炎症细胞因子白细胞介素6、白细胞介素8(IL-6、IL-8)分泌的影响,利用Western blot及细胞免疫荧光染色方法探究不同刺激成分对A549细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin1、Occludin表达的影响.结果 两种细菌培养上清及S.pneumonia裂解物可显著抑制A549细胞增殖并诱导细胞出现凋亡和坏死现象(P<0.05);两种细菌培养上清及细菌裂解物均可促进上皮细胞分泌IL-6,且两种细菌培养上清及S.pneumonia裂解物亦可促进上皮细胞分泌IL-8;两种细菌培养上清及各成分,仅S.aureus灭活菌体可降低紧密连接蛋白ZO-1的表达,但其对另外两种紧密连接蛋白Claudin1和Occludin的表达无显著影响.结论 两种细菌感染过程中,不同细菌及细菌的不同成分对上皮细胞作用并不完全相同.细菌培养上清和细菌裂解物主要影响上皮细胞增殖、炎症因子分泌等功能,S.aureus灭活菌体可降低紧密连接蛋白ZO-1的表达进而影响上皮细胞间紧密连接的完整性.