捕获和连接的环介导等温扩增技术

目的 建立捕获和连接的环介导等温扩增(CLIP-LAMP)技术,为医学诊断和病原体检测提供新的技术手段.方法 根据靶标DNA或RNA序列设计特异性的捕获探针和具有茎环结构的检测探针.无需核酸提取,直接裂解全血和干血片等样本后,通过捕获探针将靶核酸固定于96孔板上.检测探针进行特异性的连接反应,形成扩增模板,进行荧光定量的环介导等温扩增反应.将此方法应用于疟疾的检测中,定量检测疟原虫的18S rRNA,评估方法的灵敏度、特异性和重复性,并将其应用于临床样本的检测.结果 此法具有较高的灵敏度和特异性,可检测到低至0.01个/μL的疟原虫,较传统的镜检和RDT灵敏度高,可准确检测到疟原虫的感染样品.此方法可在4 h内完成96个样本的检测,快速高效.结论 建立了一种捕获和连接的等温扩增技术,为疾病的分子诊断和基因筛查提供了新的灵敏、高效的方法.