酒精诱导嗜铬细胞瘤细胞自噬及其与P62作用的关系

目的 采用不同浓度酒精作用于大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞,观察细胞自噬发生及其与P62变化的关系.方法 用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察酒精对PC12细胞生存率的影响;间接免疫荧光法检测细胞自噬标志性蛋白LC3和P62的变化;高内涵活细胞成像系统检测细胞LC3荧光强度;透射电镜检测细胞自噬的超微结构;Western blotting方法检测P62蛋白量的表达.结果 50～800mmol/L浓度酒精对PC12细胞的增殖有显著的抑制作用,呈浓度依赖性.酒精致PC12细胞自噬标志性蛋白LC3在细胞核周围密度增高,并与P62形成点状聚集共定位,其中在200mmol/L浓度酒精作用2h,PC12细胞LC3自噬荧光强度最高;透射电镜也观察到酒精作用的PC12细胞质中自噬体和自噬溶酶体.Western blotting结果显示,不同浓度酒精处理PC12细胞2h,P62蛋白表达量显著增加(P＜0.01);用200mmol/L浓度酒精处理PC12细胞,P62蛋白表达在2h达到最高值.结论 酒精诱导PC12细胞的自噬作用,P62蛋白参与自噬调控过程.