神经干细胞神经分化示踪中GFAP启动子驱动荧光报告系统的价值

背景:神经干细胞作为近年来神经科学研究的热点,在神经系统损伤治疗方面具有广阔的应用前景,但如何获取大量纯化且特征均一的终末神经细胞是这一领域的难点.利用细胞内荧光报告系统示踪神经干细胞分化的过程,并获得纯化的单一类型终末神经细胞为这一难点的解决提供了可行的方案.目的:探讨携带星形胶质细胞特异标志物GFAP基因的启动子驱动的荧光报告系统在神经干细胞神经分化示踪中的价值.方法:原代分离小鼠胚胎的脑部皮质,经机械消化和吹打后悬浮培养,免疫荧光染色检测其特异标志物Nestin的表达以确定神经干细胞.再将携带pLV/Final-neo-GFAP(promoter)-dTomato载体的慢病毒感染小鼠神经干细胞,遗传霉素G418筛选14 d后获得纯化神经干细胞,然后诱导其向星形胶质细胞分化,显微镜观察细胞红色荧光(dTomato)的变化.诱导第13天采用细胞免疫荧光技术对表达红色荧光的细胞行GFAP抗体复染.结果与结论:①原代分离获得的小鼠神经干细胞呈Nestin表达阳性;②慢病毒感染并筛选14 d后得到具有G418抗性的纯化神经干细胞;③该细胞经神经诱导分化后,显微镜下观察到红色荧光大量表达,且GFAP复染与红色荧光具有非常高的一致性;④实验成功地获得了体外表达neo-GFAP(promoter)-dTomato载体的小鼠神经干细胞,该细胞可以体外示踪GFAP基因的特异表达,为神经干细胞的定向神经分化机制、细胞移植及组织工程产品开发等研究提供了有力的工具.