小鼠 Usp25基因的雄激素反应元件的克隆与功能鉴定

目的：我们前期研究中进行全基因组表达谱检测发现在雄激素受体(androgen receptor, Ar)基因睾丸支持细胞特异性敲除小鼠( S-Ar-/ y )睾丸组织中泛素特异性蛋白酶25(ubiquitin specific peptidase 25, Usp25)基因表达较低。本研究的目的是了解雄激素及其受体是否可以作用于 Usp25基因,并测定其雄激素反应元件(androgen-responsive element, ARE)。方法采用 RT-qPCR 方法检测 Usp25基因表达量。通过生物信息学预测 Usp25基因上游可能的 ARE,构建 Usp25基因 ARE 报告质粒 pGLP/ Usp25。在 TM4细胞中,采用荧光素酶报告系统分析雄激素及其受体对 Usp25基因 ARE 活性的调控作用。结果在 S-Ar-/ y小鼠睾丸组织中 Usp25基因表达量比在野生型小鼠中显著降低。在 TM4细胞中睾酮可以显著提高 Usp25基因表达量。在 TM4细胞中,雄激素可以显著提高 pGLP/ Usp25的荧光素酶活性。结论 Usp25基因表达可以被雄激素睾酮激活, Usp25基因第一内含子519至1102 bp 区域含有 ARE,可以调控启动子的转录水平。