小鼠Cxcl10基因shRNA慢病毒表达载体构建与基因沉默效果鉴定

目的 构建携带趋化因子-Cxcl10 shRNA的慢病毒表达载体,并鉴定其在BV-2细胞中的沉默效果.方法 将含有针对小鼠Cxcl10的ShRNA序列克隆到pGC-LV载体中,包装浓缩后用293T 细胞测定病毒滴度.将Cxcl10 ShRNA慢病毒载体分别以感染复数MOI为1,10和100的条件感染BV-2细胞,72 h后采用real-time PCR技术和Western印迹检测shRNA对Cxcl10基因的沉默效果.结果 Cxcl10 ShRNA被成功构建入慢病毒表达载体pGC-LV,病毒滴度为5×108 TU/ml.用感染复数(MOI)为1或10的shRNA慢病毒感染BV-2细胞,可沉默约35 %的Cxcl10基因表达,当MOI为100时,Cxcl10基因的沉默效果为65 %,并可有效下调CXCL10蛋白的表达.结论 成功构建了携带Cxcl10 shRNA的慢病毒载体,为研究趋化因子CXCL10在疼痛、吗啡镇痛中的作用提供了有效的研究工具.