蜱传脑炎病毒prM-E蛋白的真核表达及其在荧光素酶免疫共沉淀技术中的应用?

为了探索一种新型的血清学技术的荧光素酶免疫共沉淀技术（LIPS），本研究利用真核表达系统制备了蜱传脑炎病毒结构蛋白prM?E与荧光素酶融合蛋白，并评价了其在LIPS系统中的检测效果。首先以蜱传脑炎病毒RNA为模板，采用RT?PCR技术扩增prM?E抗原基因，连接到pNLF1?secN质粒上构建真核表达载体pNLF?prM?E，使prM?E蛋白与荧光素酶串联融合表达，并将该质粒转染到Cos7细胞中。结果显示，转染重组质粒pNLF?prM?E的细胞上清中可检测到荧光素酶的高表达；进而用间接免疫荧光试验（ IFA）检测到转染的细胞与蜱传脑炎病毒抗体特异性结合；在此基础上，用LIPS方法对蜱传脑炎病毒感染患者血清进行检测，从20份患者血清中检出19份阳性，7份对照血清均为阴性。结果表明该重组抗原具有良好的特异性和灵敏性，可以用于LIPS系统中的候选检测抗原。