抗微小隐孢子虫 Apple 结构域单克隆抗体的制备

采用PCR技术从已构建的微小隐孢子虫cDNA文库中扩增含Apple 结构域基因，构建pGEX-4T-1-Apple重组质粒，并进行原核表达及纯化，得到分子质量大小约为34 kDa的GST-Apple重组蛋白，以其为免疫原，免疫Balb/c小鼠，利用杂交瘤技术制备单克隆抗体，测定其免疫球蛋白亚类及效价，并用蛋白质印迹法（Western-blot）鉴定其特异性。结果共筛选出能稳定分泌抗重组Apple单克隆抗体的2株杂交瘤细胞株，抗体亚类均为IgG1， Western-blot分析显示2株单抗均能与重组蛋白GST-Apple发生特异性结合。为研究Apple结构域在隐孢子虫侵入过程中的功能提供有效工具。