过氧化氢诱导人皮肤成纤维细胞衰老模型的建立

目的 应用过氧化氢(H2O2)诱导人皮肤成纤维细胞衰老,建立体外细胞衰老模型.方法 组织块贴壁法分离培养人皮肤成纤维细胞,免疫荧光法对获得的细胞进行鉴定,采用50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L的H2O2处理细胞1h、2h两个时间点,然后正常培养4d,应用细胞增殖实验,衰老相关的3-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色实验,确定H2O2氧化应激下的损伤力和细胞衰老率.结果 镜下可见细胞呈梭形或多角形,结合免疫荧光结果,分离获得的细胞即为成纤维细胞.用50μmol/L、100μmol/L H2O2处理1h、2h后虽然活细胞较多,但是SA-β-gal染色阳性率较低.200μmol/L、400μmol/LH2O2处理2h组SA-β-gal染色阳性率较高,但细胞量较少给以后实验带来较多困难.200μmol/L、400μmol/L H2O2处理1h组细胞数量,SA-β-gal染色阳性率最高且二者间无明显差异.结论 选取200μmol/L H2O2处理1h作为建立衰老细胞模型.